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      細菌和真菌的保存方法

      • 生物保存是保存細胞完整性和功能的過程。
      • 大多數細菌實驗室都為教育,研究,生物測定,工業或其他目的維護微生物的原種培養。
      • 各種各樣的技術可用于細菌的保存,并且可能難以為特定菌株選擇方法,這不僅可以確保生存,而且還可以確定基因型及其獨特特性不會改變。 
      • 保存培養物的主要目的是保持生物體的存活,不受污染且沒有變異或突變,也就是說,將培養物保存在與原始分離株盡可能接近的條件下。

      瓊脂偏斜培養

      • 所有微生物實驗室都將微生物保存在瓊脂斜面上。
      • 接種瓊脂斜面并孵育直至出現良好的生長。
      • 然后將它們用無菌礦物油覆蓋至傾斜表面**上方1厘米的深度。
      • 將斜面孵育24小時或更長時間,然后將其存儲在冰箱中。
      • 這些文化定期轉移到新鮮的媒體。
      • 通過去除充滿生長的環,將環接觸玻璃表面以排出多余的油,接種新鮮的培養基,然后保留**初的原種培養,進行轉移。
      • 進行轉移的時間間隔隨生長的起源和條件而變化。
      • 這是一種簡單,**經濟的保存細菌和真菌的方法,它們在室溫下可以存活數年。

      冷藏

      • 純培養物可以成功地在0-4°C的冰箱或冷藏室中保存。
      • 此方法適用時間短(細菌需要2-3周,真菌需要3-4個月),因為微生物的代謝活動會大大減慢但不會停止。
      • 因此,它們的生長持續緩慢,營養物質被利用,廢物在介質中釋放。**終導致一段時間后微生物死亡。

      石蠟法

      • 這是維持細菌和真菌純培養物的一種簡單且**經濟的方法。
      • 在這種方法中,將無菌液體石蠟倒入培養物的斜面(斜坡)上,并在室溫下直立保存。
      • 石蠟層可確保厭氧條件并防止培養基脫水。
      • 這種條件有助于微生物或純培養物保持休眠狀態,因此,該培養物可保存數年。

      鹽懸浮液

      • 高濃度的氯化鈉通常是細菌生長的抑制劑。
      • 將細菌懸浮在1%的鹽溶液中(螺帽管內的濃度應達到致命濃度,以防止蒸發)。
      • 試管在室溫下保存。每當需要時,均在瓊脂斜面上進行轉移。

      冷凍保存

      • 冷凍保存(即在196°C的液氮中冷凍)有助于長時間保存純培養物。
      • 在這種方法中,在穩定劑如甘油的存在下,將培養的微生物在-196°C的液氮中迅速冷凍,以防止冰晶形成并促進細胞存活。

      凍干(冷凍干燥)

      • 在這種方法中,將培養物在非常低的溫度(-70°C左右)下快速冷凍,然后通過真空脫水。
      • 在這些條件下,微生物細胞脫水,其代謝活動停止;結果,微生物進入了休眠狀態并保持了數年的生存能力。
      • 凍干或冷凍干燥的純培養物,然后密封并在4°C的黑暗條件下在冰箱中儲存。
      • 冷凍干燥法是培養物收集中心**常用的技術。

      凍干過程

      • 在此過程中,將微生物懸浮液放入小瓶中。
      • 在-78 o C 的溫度下,通過在干冰(固態二氧化碳)和酒精或丙酮的混合物中旋轉薄膜,將薄膜冷凍在小瓶的內表面上。
      • 樣品瓶立即連接到高真空管線。這使仍在冷凍的生物干燥。
      • **后,將安瓿瓶在真空中用小火焰密封。
      • 這些培養物可以在40°C下保存幾年。
      • 該方法還用于保存毒素,血清,酶和其他生物材料。
      • 要使微生物培養物恢復活力,只需要在無菌條件下打開小瓶,添加合適的陳舊培養基,孵育后再進行進一步轉移即可。
      • 該方法允許維持更長數量的培養物而不會改變培養物的特性,并大大降低了污染的危險。

      低溫保存

      • 生物體懸浮在含有15%甘油的營養肉湯中。
      • 將懸浮液冷凍并儲存在-15℃至-30℃。

      真空干燥保存

      • 將有機物在真空中用氯化鈣干燥,然后存儲在冰箱中。
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